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O que é controle FMO?

O controle fluorescence minus one (FMO) permite a definição precisa de onde gates devem ser inseridas nos gráficos de citometria de fluxo. Desta forma, pode ser determinada com mais precisão o que realmente é fluorescência e o que é background.


O controle FMO é uma amostra que foi marcada com todos os reagentes do painel de citometria, exceto um. A análise do controle FMO permite a definição precisa de células positivas em relação ao background.


No exemplo, publicado por Perffeto e colaboradores, foi comparada células marcadas com anti-CD3 FITC (isto é, anticorpos monoclonais específicos para CD3 conjugados com o fluorocromo FITC), anti-CD4 PE, anti-CD8 Cy5 PE e anti-CD45RO PE-Cy7 com o controle de células não marcadas e com o controle FMO para CD4, que consiste em células marcadas com todos os anticorpos conjugados, exceto os anticorpos específicos para CD4 (figura).



Na figura, deve-se notar que quando a amostra não corada é utilizada como controle para determinar as populações de células CD4 positivas e negativas, este controle não é adequado, pois a gate fica muito abaixo do que realmente seria a população positiva. Desta forma, o resultado seria incorreto. No entanto, quando o controle FMO CD4 é utilizado como controle para determinar as populações de células CD4 positivas e negativas, as populações são identificadas corretamente através da gate, dando assim uma representação mais precisa da porcentagem da população que compreende células CD4 positivas.



Referência.

doi:10.1038/nri1416

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