Quantos parâmetros temo maior painel publicado de citometria de fluxo?

O maior painel publicado de citometria de fluxo possui 50 parâmetros.

O OMIP-102, publicado na Cytometry Part A, apresenta um painel de citometria espectral com 50 fluorocromos, desenvolvido para a caracterização aprofundada do sistema imune humano, com atenção especial às células T e células dendríticas.

Artigo: OMIP-102: 50-color phenotyping of the human immune system with in-depth assessment of T cells and dendritic cells.

Mas o objetivo do trabalho foi muito além de simplesmente explorar os limites da citometria espectral.

Os autores desenvolveram um painel otimizado, testado e validado, buscando maximizar a quantidade de informação obtida em uma única amostra e, ao mesmo tempo, manter resolução suficiente para identificar diferentes populações e estados de diferenciação e ativação celular. O painel foi inicialmente otimizado utilizando PBMCs humanos e inclui marcadores para as principais populações do sistema imune.

E talvez uma das partes mais interessantes do artigo seja justamente como esse painel foi construído.

Durante o desenvolvimento, os autores utilizaram e discutiram diferentes ferramentas para auxiliar a tomada de decisão no desenho de painéis de alta dimensionalidade.

Ferramentas utilizadas:

• Similarity index entre fluorocromos;

• Avaliação do brilho dos fluorocromos;

• Seleção computacional de combinações de fluorocromos;

• Avaliação do spreading error dependente do unmixing;

• Relação entre coexpressão dos marcadores e escolha dos fluorocromos;

• Controles FMO para avaliação da resolução do painel.

Os autores começaram com uma seleção manual de 40 fluorocromos e utilizaram uma abordagem algorítmica para identificar combinações que permitissem chegar aos 50 cores. O trabalho também mostra exemplos de reagentes testados e descartados durante a otimização, tornando o material suplementar particularmente interessante para quem trabalha com desenho de painéis complexos.

Referência:

Konecny AJ, Mage PL, Tyznik AJ, Prlic M, Mair F. OMIP-102: 50-color phenotyping of the human immune system with in-depth assessment of T cells and dendritic cells. Cytometry. 2024;105(6):430–436. DOI: 10.1002/cyto.a.24841.