Seu painel foi desenhado. Mas ele já foi otimizado?

Escolher marcadores e atribuí-los aos fluorocromos é apenas o ponto de partida. Antes de usar amostras limitadas ou de difícil reposição, é importante demonstrar que o painel funciona quando todos os reagentes são combinados.

Um processo de otimização pode incluir seis verificações:

1. Titular todos os anticorpos e também o viability dye.

2. Comparar beads e células como controles de referência, avaliando qual opção promove melhor cálculo de compensação ou unmixing.

3. Verificar a compensação ou o unmixing na amostra com todas as marcações.

4. Comparar a resolução dos controles single stained com a amostra totalmente marcada e identificar os marcadores que apresentam distorções.

5. Confirmar se as populações esperadas estão presentes e biologicamente coerentes.

6. Caracterizar a autofluorescência e planejar seu gerenciamento.

Otimizar não significa gerar um painel “perfeito”. Significa reconhecer limitações, corrigir interferências relevantes e preservar a biologia e interpretação dos dados antes de avançar para as amostras.

Salve este checklist e compartilhe com sua equipe.

Referência: DOI: 10.1002/cpz1.222.