1. Utilize a melhor combinação de fluorocromos

É preciso ter parcimônia na construção de um painel de citometria de fluxo espectral, mesmo diante da possibilidade de utilizar combinações de fluorocromos que não seriam viáveis na citometria de fluxo convencional.

Além de atentar-se aos princípios de combinar o brilho dos fluorocromos com o nível de expressão dos antígenos e de selecionar fluorocromos adequados para antígenos em co-expressão, na citometria de fluxo espectral também é fundamental escolher a melhor combinação de fluorocromos, considerando seu cosine similarity (CS, mais frequentemente referido como índice de similaridade), spillover-spreading error (SSE) e o unmixing-spreading error (SE).

Quando seu painel apresentar mais fluorocromos discrepantes entre si (cosine similarity), além de menores valores de spillover-spreading error (SSE) e menores valores de unmixing-spreading error, melhor será o cálculo de unmixing, menor será o spillover (sobreposição de fluorescências) e assim maior será a resolução das suas marcações. Em outras palavras, quanto mais distintas forem as assinaturas espectrais de cada fluorocromo presente no painel e quanto mais corretamente elas forem correlacionadas com as características dos antígenos, mais fácil será identificá-los no processo de unmixing e mais claramente as populações positivas e negativas se separarão entre si. Os melhores fluorocromos, apresentam menores cosine similarity entre si, valores reduzidos de spillover-spreading matrix e menores unmixing-spreading error.

Nos próximos dois dias, iremos entender melhor o que são o cosine similarity (CS), spillover-spreading error (SSE) e unmixing-spreading error (SE).

Conte com a CYTO-flowing para a revisão de seus painéis de citometria de fluxo.

doi: 10.1002/cyto.a.24841

doi: 10.1101/2025.04.17.649396

doi: 10.1002/cyto.a.22251