2. Similarity Index ou melhor Cosine Similarity (CS)

Em um OMIP (Optimized Multicolor Immunofluorescence Panel) publicado ano passado, foi possível criar um painel de citometria de fluxo espectral de 50 cores. Além de demonstrar o potencial da tecnologia atual, o artigo apresenta uma similarity matrix entre os fluorocromos utilizados, calculada por meio de cosine similarity (CS) ou mais frequentemente chamado de similarity index (SI). Essa tabela foi levada em consideração para o planejamento deste painel high-parameter (Figura 1 e Figura 2).

De uma forma simplicada, o cosine similarity (CS) quantifica a sobreposição entre as assinaturas espectrais de fluorescência de fluorocromos. Essa informação auxilia na seleção de fluorocromos com assinaturas espectrais mais discrepantes para compor o painel de citometria de fluxo espectral e assim maximizar a resolução das marcações. Para quem desejar se aprofundar, o cosine similarity (CS) é definido pelo cosseno do ângulo de vetores definidos pela assinatura espectral quando compado dois fluorocromos (Figura 3).

Os valores de cosine similarity (CS) são apresentados em uma similarity matrix (SM), cuja escala varia de 0 a 1. Valores mais próximos a 1 indicam que as fluorescências dos fluorocromos comparados são mais semelhantes. Em geral, recomenda-se utilizar em um painel de citometria de fluxo espectral, fluorocromos com índice de similaridade inferior a 0,90. Valores entre 0.90 e 0.95 podem ser utilizados principalmente em antígenos não co-expressos e com muita otimização. No entanto, isso pode acarretar perda de resolução do painel como um todo.

Além do cosine similarity (CS), o spillover-spreading error (SSE) e unmixing-spreading error (SE) também devem ser levados em consideração para construção de painéis de citometria de fluxo espectral. Aguarde até amanhã para aprender mais.

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Referências:

doi: 10.1002/cyto.a.24841

doi: 10.1101/2025.04.17.649396