A citometria de fluxo espectral é a solução de todos os problemas?

A citometria de fluxo espectral promoveu um grande avanço ao ampliar a quantidade de parâmetros que podem ser avaliados simultaneamente em um único painel. Com isso, tornou-se possível explorar de forma muito mais profunda a heterogeneidade das populações celulares presentes em nossas amostras. Além disso, essa tecnologia aumentou a resolução das marcações, uma vez que apresenta detectores mais potentes e a possibilidade de extração da autofluorescência.

Contudo, mesmo sendo um marco importante na área da citometria de fluxo, ela não é, por si só, a solução para todos os problemas. Ainda é necessário planejar e otimizar os painéis (muitas vezes com maior rigor do que na citometria convencional) para garantir resultados de qualidade.

Na citometria de fluxo convencional, apenas uma parte da fluorescência emitida por um fluorocromo é detectada em um canal específico (canal é entendido como a combinação de filtros ópticos que seleciona uma faixa estreita do espectro de emissão e a direciona a um detector). Dessa forma, como cada canal detecta seletivamente apenas uma faixa da fluorescência, o número de fluorocromos que pode ser utilizado simultaneamente fica limitado à quantidade de canais disponíveis no citômetro de fluxo.

Já na citometria de fluxo espectral, uma grande parte do espectro de fluorescência emitido pelos fluorocromos é detectado. Para isso, múltiplos detectores cobrem uma ampla faixa de comprimentos de onda, permitindo a determinação da assinatura espectral de cada fluorocromo. Desta forma, é possível distinguir fluorocromos mesmo quando apresentam espectros de emissão muito semelhantes - os quais seriam detectados em um mesmo canal na citometria de fluxo convencional e não poderiam ser utilizados concomitantemente.

Podemos observar que essa tecnologia traz inúmeros benefícios, mas somente quando executada seguindo boas práticas. Pensando nisso, nas próximas semanas iremos lançar uma serie e postagens chamada 10 dias, 10 dicas para o uso da citometria de fluxo espectral. Acompanhe e aprenda mais!

Série de postagens: 10 dias, 10 dicas de citometria de fluxo espectral