10. Autofluorescência

A autofluorescência é um fator intrínseco das células, causado pela emissão natural de fluorescência por suas moléculas constituintes. Diferentes amostras apresentam assinaturas distintas de autofluorescência, que variam de acordo com fatores como tipo celular, estado metabólico, preparo da amostra e protocolos de marcação.

A autofluorescência impacta negativamente o desempenho de um painel de citometria de fluxo espectral, pois complica o processo de unmixing. Em amostras que apresentam um perfil heterogêneo de autofluorescência, torna-se mais difícil identificar com precisão a assinatura espectral de todos os fluorocromos utilizados, já que podem existir semelhanças entre as múltiplas assinaturas de autofluorescências e a assinatura espectral dos fluorocromos.

Roet e colaboradores em uma publicação em 2024, demonstraram que quando uma amostra apresenta heterogeneidade de autofluorescência, uma solução é adicionar várias referências específicas desse sinal (Figura 1).

Além disso, antes de construir um painel, é fundamental caracterizar a autofluorescência da amostra. Essa informação auxilia na seleção de fluorocromos, evitando a inclusão daqueles cuja assinatura espectral seja muito semelhante à autofluorescência da amostra analisada.

Referências:doi: 10.1002/cyto.a.24856doi: 10.1002/cpz1.222